瘡痂病病原調(diào)查材料及方法

選取泰國(guó)種番石榴果園調(diào)查及記錄瘡痂病發(fā)病率,并采集罹瘡痂病枝條、老葉攜回實(shí)驗(yàn)室內(nèi),先以解剖顯微鏡觀察有無(wú)PestalotiapsidiiPat.分生孢子盤(pán),再以光學(xué)顯微鏡檢查其分生孢子。將該菌以單孢分離法分離、培養(yǎng)于PDA經(jīng)10日后,選取PP-1(新?tīng)I(yíng)果實(shí)分離)、PPT-1(新?tīng)I(yíng)枝條分離)、PPL-1(新?tīng)I(yíng)葉片分離)菌株參試,試驗(yàn)時(shí)將孢子配制成106／ml懸浮液,噴霧接種于泰國(guó)種番石榴果實(shí)及嫩梢后套袋保濕,對(duì)照組噴以無(wú)菌水,每處理4重複;放置25℃定溫箱并逐日調(diào)查是否發(fā)病。

溫度與病原菌孢子發(fā)芽、菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量關(guān)系

為明瞭病原菌孢子于不同溫度的發(fā)芽情形,在2％Wateragar上滴入0.1mlPP-1菌株之106／ml濃度孢子懸浮液參試,在25℃定溫箱中,每隔1小時(shí)取出4個(gè)培養(yǎng)皿,滴入棉藍(lán)染液后,每皿逢機(jī)調(diào)查200個(gè)孢子發(fā)芽情形,以瞭解孢子發(fā)芽所需時(shí)間。另在5-35℃每隔5℃定溫箱中經(jīng)8小時(shí)后,同上述計(jì)算孢子發(fā)芽率,每一溫度5重複。為瞭解病原菌菌絲生長(zhǎng)的最適溫度,在PDA平板上各接種培養(yǎng)4天的8mm圓徑PP-1菌株之同生長(zhǎng)勢(shì)濾紙菌絲塊于培養(yǎng)基中央;在5-35℃間隔5℃每日照光12小時(shí)培養(yǎng)箱中,經(jīng)培養(yǎng)6天后,測(cè)量菌落的縱橫直徑,再減去原先接種源8mm圓徑,每溫度5重複。同上述菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn),在各溫度培養(yǎng)10日后,每培養(yǎng)皿加入無(wú)菌水10ml洗下孢子,取1滴于血球計(jì)數(shù)器(haemacytometer)以400倍視野計(jì)算大格中的孢子數(shù),共逢機(jī)計(jì)算12個(gè)大格并換算為其濃度,即平均每大格中的孢子數(shù)乘以2.5X105,再乘以稀釋的倍數(shù),即為每1ml中孢子的濃度。而每一大格中的孢子數(shù)應(yīng)落在2-6個(gè)之間,若鏡檢所得數(shù)目大于6時(shí),則再稀釋后鏡檢及換算(7),比較不同溫度下的產(chǎn)孢情形