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冷凍細(xì)胞活化實(shí)驗(yàn)步驟
凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶傷害細(xì)胞。細(xì)胞活化后,需立刻培養(yǎng),儘速培養(yǎng)基,需數(shù)日或繼代一至二代,細(xì)胞生長(zhǎng)及特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)。
步驟:
1.將冷凍管由-80℃冰箱中取出,放入37℃水浴中輕輕地?fù)u動(dòng)使得在微溫水中迅速地解凍
2.待冷凍管中還有一小塊冰塊,即取出37℃水浴,以 75%酒精擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺(tái)內(nèi)的冰盒里。
3.用擰乾的酒精棉花來擦拭冷凍管管口部分。取出 0.95ml 解凍之細(xì)胞懸浮液,加入有培養(yǎng)基之離心管中(10倍以上稀釋),混合均勻,離心1,200 rpm, 5分鐘,移去上層液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
4.另取0.05ml解凍細(xì)胞懸浮液作細(xì)胞數(shù)測(cè)定,來計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)目。
5.隔天換一次培養(yǎng)基,將死細(xì)胞去除
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