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生物體或礦物本身具有自發(fā)熒光特點較少-
熒光顯微鏡常識
最大的限制就是必須要用螢光分子。然而自然界的材料,
不論是生物體或礦物,具有自發(fā)螢光特性的分子仍屬少數(shù),大部分均需要外加染劑以標定目標分子。
另外要找到適合的螢光分子也很不容易。首先是螢光分子本身需要有適當?shù)哪茈A分佈或是特殊的化學結構變化,
能夠靠外加光場造成螢光效應的抑制。而且這些螢光分子還最好要能很快的從被抑制的狀態(tài)中恢復
,才能繼續(xù)進行下一個點的掃瞄。如果一旦一群螢光分子被抑制后得花上一秒才能恢復,
那么掃瞄一張 256 × 256 的影像就要耗費將近一天的時間,
不太實際。其次是針對想觀察的生物化學反應,不見得都能找到適合的螢光分子做標定。雖說如此,
只要有適當?shù)奈灩鈽硕ǚ肿,STED 也能做到每秒超過 28 張影像的即時觀測[2],
讓研究者們對活體細胞中奈米尺度的生物化學現(xiàn)象有更直接的觀察
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