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本文標(biāo)題:"熒光顯微鏡觀察較厚熒光標(biāo)本圖像模糊的原因"

新聞來源:未知 發(fā)布時(shí)間:2014-2-28 23:36:49 本站主頁地址:http://m.mhzljd.cn

熒光顯微鏡觀察較厚熒光標(biāo)本圖像模糊的原因

    共聚焦顯微鏡可清晰地顯示相對(duì)較厚的(厚達(dá)幾百微米)標(biāo)本內(nèi)
部結(jié)構(gòu)圖像,尤其適于檢測熒光標(biāo)本。使用傳統(tǒng)的寬視場熒光顯微鏡
時(shí),由于標(biāo)本全層的熒光團(tuán)都被光照到,而且它不僅收集焦平面上的
熒光信號(hào),還收集焦平面上下方的熒光信號(hào)

    所以用它來觀察較厚熒光標(biāo)本時(shí),圖像模糊且反差小。而共聚焦
顯微鏡則選擇性收集來自標(biāo)本內(nèi)部相當(dāng)于單一焦平面的光切面(約1
μm )的光線。由于共聚焦顯微鏡基本沒有來自離焦區(qū)的光線,所以
它所觀察的焦平面內(nèi)結(jié)構(gòu)要比傳統(tǒng)顯微鏡清晰得多。一系列不同厚度
的光切面可使標(biāo)本的三維圖像得以重建。

    在檢測組織片或完整的小生物(如果蠅和斑馬魚的胚胎)中的熒
光染色細(xì)胞時(shí),可選用共聚焦顯微鏡。共聚焦顯微鏡也可用來定位分
離細(xì)胞內(nèi)的熒光標(biāo)記分子。由于其靈敏度較高,甚至可以用來監(jiān)控活
體標(biāo)本內(nèi)的熒光,使得示蹤熒光探針如綠色熒光蛋白的利用成為可能。

    此外,有些型號(hào)的共聚焦顯微鏡加以調(diào)整后,可用于光漂白實(shí)驗(yàn)
及光敏化“籠鎖”分子(紫外光照射前為失活狀態(tài))

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