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普通光學(xué)
顯微鏡下離體細(xì)胞是透明的需配置相襯裝置
光學(xué)顯微鏡術(shù)
至此,所提及的那些技術(shù)只能應(yīng)用于由固定劑殺死的細(xì)胞。它們
作為有關(guān)組織培養(yǎng)貴料的來源無疑地是有價(jià)植的,但是,它們顯然都
不能達(dá)到研究活的動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的主要目的。
在普通光學(xué)顯微鏡下離體細(xì)胞是透明的,實(shí)際上是看不見的,這
一事實(shí)對早期組織培養(yǎng)工作者十分不利。那時(shí)詳細(xì)研究活細(xì)胞唯一可
用的方法是暗視野照明,即應(yīng)用一個(gè)特殊的臺下聚光鏡問接地照射標(biāo)
本,所以只有進(jìn)人物鏡的光才能被細(xì)胞散射,
因而在黑暗的背景下顯出欣亮的是細(xì)胞部分。不過,對這種技術(shù)
來說細(xì)胞生長容器的光學(xué)特性是很關(guān)鍵的,由于只有很少部分的光參
與成像作用,因此除非顯微鏡配備照像閃光燈設(shè)備,否則需耍長期曝
光才能拍成照片。
相差顯微鏡
1942年德國物理學(xué)家(Frits Zernicke)為顯微鏡學(xué)家解決。了
觀察活細(xì)胞的問題。他在研究天文望遠(yuǎn)鏡的鏡面時(shí),發(fā)現(xiàn)了相差的理
論,并認(rèn)識到這一可應(yīng)用于顯微鏡。
配備有相差的儀器時(shí),人們很快地意識到這在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室里
幾乎也是必不可少的
相差顯微鏡在活細(xì)胞研究上連續(xù)不斷地作出了無數(shù)的成果。此外,
由于物理學(xué)研究而發(fā)明了相差顯微鏡,也表明生物學(xué)的發(fā)展愈來愈依
賴于基礎(chǔ)科學(xué)的發(fā)展。
為了使皿微鏡產(chǎn)生一個(gè)相差像,需要加人另一些組件,它們包括
一個(gè)在臺下聚光鏡光欄中帶有透明孔的黑盤和一個(gè)在物鏡聚焦面背部
有環(huán)狀溝的“相差板”。
在物鏡的后聚焦面形成一個(gè)在聚光鈍下清晰的環(huán)狀像,此像必須
與相差板的環(huán)狀溝相一致,簡言之,與光通過密度小的區(qū)域相比,被
標(biāo)本的光學(xué)致密結(jié)構(gòu)所反射的光減弱(即相消失)。
相差系統(tǒng)使這兩類光相互作用,并把肉眼不能察覺的相差改變成
眼睛能觀察的波幅差。因此,使用通常類型的設(shè)備,細(xì)胞的致密結(jié)構(gòu)
在最后成像中看起來較深黑。
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