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細胞應采用分步的方式達到臨界凍存點以使內部冰晶不能形成和水外流受到抑制。
可購買程序化的細胞凍存器(Nunc ),來調節(jié)凍存細胞管的冷凍速率以達到最大限度地
保存細胞活力。一分鐘下降1℃為溫度降低的標準。較簡單的凍存裝置包括液氮罐頂蓋
上的隔溫支架,可使凍存管保持在氣相的上方。泡沫聚苯乙烯制作的隔溫支架能夠將細
胞隔絕,凍存管下降至液氮罐的不同深度則能達到不同的冷凍速率。根據(jù)經驗可判斷冷
凍管放置的深度。如果在液氮罐中無存放空間或已凍存細胞在貯存罐中的體積無法判斷
的情況下,可將細胞置一80℃存放數(shù)月。許多實驗室在將細胞放入液氮前先將細胞置
一80℃冰箱,放置一80℃的隔離程度憑經驗而定。
細胞儲存在液氮罐氣相中的優(yōu)點是可使用螺絲蓋狀細胞管保存細胞,因為液氮不易
漏人管中。數(shù)家公司制造這種凍存管,可將該管淹沒于液氮中(如Union Carbide或MVE
Cyrogenics)。液氮漏人冷凍管中可導致細胞復蘇效率降低。
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