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本文標(biāo)題："高效液相層析-液固層析和液層析實(shí)驗(yàn)"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2016-10-2 13:51:09 本站主頁地址：http://m.mhzljd.cn
高效液相層析-液固層析和液層析實(shí)驗(yàn)
混合性凝膠是由上述凝膠按不同比例混合而成，這類凝膠的顆粒及
孔徑比較均一、機(jī)械性能好、耐高壓、流速快且分辨率高。
凝膠層析法設(shè)備簡單、操作方便，故早已被用于同工酶的分離，但
由于大多數(shù)同工酶的相對(duì)分子質(zhì)量均很接近，故凝膠層析法主要用于分
離同工酶的高分子聚合物或同工酶與免疫球蛋白的復(fù)合物。
(三)親和層析法 是利用配基和大分子之間專一性親和力而設(shè)計(jì)的
一類層析分離方法。將相應(yīng)的配基(如底物、輔酶、抗體)與某種適宜的
不溶性大分子基質(zhì)(常用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠)共價(jià)地結(jié)合，將
樣品加到浸泡于緩沖液中的不溶性基質(zhì)柱上，其中某些同工酶被選擇性
地留在柱上，其他型別被洗脫。然后用不同pH和不同離子強(qiáng)度的含有底
物的溶液將吸附于柱上的同工酶洗脫收集，并測其活性，此謂親和層析
法。此法過程簡單、迅速、特異性高、分離效率強(qiáng)，適于分離和提純同
工酶。
(四)高效液相層析法 又稱高效液相色譜法、高壓或高速液相色譜
法，是在經(jīng)典柱層析的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的，具有高效、高速、高靈敏度
和自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。按固定相聚集狀態(tài)可分為液固層析和液液層析兩大類
；按分離機(jī)制不同可分為吸附、分配、離子交換凝膠和親和層析等類型
。在凝膠滲透色譜分析中，大分子的同工酶被排阻無法進(jìn)入填料孔，最
先洗脫；小分子的同工酶可滲入填料孔，洗脫滯后。整個(gè)過程是在流動(dòng)
相和填料孔內(nèi)的固定相液體之間進(jìn)行溶質(zhì)分子分配的過程。在離子交換
色譜中的固定相是帶電的交換基團(tuán)，該基團(tuán)與酶蛋白分子的離子基團(tuán)相
互交換，根據(jù)不同離子基團(tuán)的交換特性之差異及相互作用不同，將同工
酶分離。
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