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(點(diǎn)擊查看產(chǎn)品報(bào)價(jià))
顯微鏡培養(yǎng)箱成像細(xì)胞的溫度實(shí)驗(yàn)圖像顯微鏡
用括號(hào)中的任一儀器保持成像細(xì)胞的溫度(例如,完全封閉的顯微
鏡培養(yǎng)箱,循環(huán)水浴溫度控制器,獨(dú)立控制的階段加熱器,熱空氣
對(duì)流元件)。注意:這些溫度控制元件的效率和價(jià)格按照從前到后
依次遞減。3.各種可用的熒光蛋白極大地降低了成像的硬件要求
。使用標(biāo)準(zhǔn)的激發(fā)源和濾過(guò)設(shè)備能捕獲很多這些蛋白質(zhì)。4.EGFP
和EYFP,作為最常用的綠色熒光蛋白,能在一定程度上抵抗光漂白
作用,但是在任何試驗(yàn)中都要考慮這種現(xiàn)象。應(yīng)該盡可能地降低這
些激發(fā)力,以延長(zhǎng)熒光標(biāo)記物的壽命。5.通常盡可能地保持蛋白
質(zhì)的低表達(dá),因?yàn)楹芏嗖溉閯?dòng)物表達(dá)質(zhì)粒中所用的強(qiáng)啟動(dòng)子能引起
熒光蛋白過(guò)表達(dá)的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng),并且熒光蛋白的桶狀結(jié)構(gòu)可以使
其較弱[如水母(Aequoreavictoria)突變體]或者較強(qiáng)[如某些珊瑚
和異輻?(Disco一50maandHeteractiscrispa)突變體]地自我交
聯(lián)。6.開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)考慮到整個(gè)研究的時(shí)間進(jìn)程。如果實(shí)驗(yàn)進(jìn)
程很快,成像的間隔時(shí)間應(yīng)該很小或?yàn)榱。在這種情況下,影像掃
描和影像收集也要迅速。由于信噪比會(huì)隨所收集的光子數(shù)目的平方
根增加(即掃描時(shí)間越長(zhǎng),信噪比越好),增加幀頻通?山档托旁
比。由于進(jìn)程較慢的研究掃描時(shí)間更長(zhǎng),并且有更長(zhǎng)的時(shí)間間隔,
因此可以減少這些限制。兩種情況均應(yīng)考慮整個(gè)激發(fā)時(shí)間以減少光
漂白效應(yīng)。7.使用傳統(tǒng)的
熒光顯微鏡技術(shù)定位目的熒光細(xì)胞后,
首先調(diào)節(jié)焦距、激發(fā)水平和探測(cè)器的捕獲能力,在較短的時(shí)間內(nèi)掃
描細(xì)胞,探測(cè)器可以從感興趣的焦平面獲取足夠的信號(hào)。要盡可能
快地完成這些步驟,以減輕甚至在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前就開(kāi)始的光漂白效應(yīng)
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