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本文標(biāo)題："照光培養(yǎng)與暗培養(yǎng)對(duì)癒合組織誘導(dǎo)的影響！"

盆栽迷迭香葉面具有許多絨毛，葉背呈凹陷狀，內(nèi)藏許多油胞，造成滅
菌不易�？上刃袑⑴柙悦缘�香移至室內(nèi)二週，每三天噴灑億力(Benlate,杜
邦)1000倍稀釋液，進(jìn)行初步之淨(jìng)化；再取枝條上端新長(zhǎng)出之細(xì)嫩部分，利
用0.5﹪次氯酸鈉(NaOCl)溶液，加2滴/100ml展著劑Tween-20，激烈振盪
進(jìn)行表面消毒10分鐘，最后以無(wú)菌水沖洗數(shù)次后備用，進(jìn)行以下的試驗(yàn)。

一、照光培養(yǎng)與暗培養(yǎng)對(duì)癒合組織誘導(dǎo)的影響
將滅菌過(guò)的葉片材料，切成0.6㎝長(zhǎng)之片段，作為誘導(dǎo)癒合組織之培
植體，培養(yǎng)于含有Thiamine·HCl0.4mg/l、Pyridoxine·HCl0.5mg/l、Nicotinic
acid0.5mg/l、Myo-Inositol100mg/l、Glycine1.0mg/l、4﹪(w/v)Sucrose
、20﹪(v/v)coconutwater及0.8﹪Merckagar的VW(26)基本鹽類(lèi)固體培養(yǎng)
基(pH=5.3)，添加2,4-D(2,4-dichlorophenoxyaceticacid)5mg/l及
BA(6-benzyladenine)0.5mg/l等生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度，于溫度25±1℃，光強(qiáng)度
1,750lux，進(jìn)行每日16小時(shí)之照光培養(yǎng)及暗培養(yǎng)二種處理，每一處理30
個(gè)培植體，二個(gè)月后調(diào)查癒合組織的誘導(dǎo)率及組織質(zhì)地。癒合組織誘導(dǎo)率為
計(jì)算未褐化死亡、培植體表面增生綠色或土黃色癒合組織團(tuán)所佔(zhàn)的比率。

二、不同濃度BA與NAA對(duì)癒合組織增殖的影響
將葉培植體置于2,4-D5mg/l、BA0.5mg/l濃度下，經(jīng)照光培養(yǎng)或暗培
養(yǎng)所誘得的癒合組織，切成直徑約5㎜，培養(yǎng)于含有adeninesulfate40mg/l
、NaH2PO4·H2O170mg/l、3﹪Sucrose及1﹪Merckagar之MS(22)固體培
養(yǎng)基(pH=5.2)，配合BA0,2,4,8mg/l及NAA0,0.01,0.05,0.1,0.2mg/l
，作為癒合組織增殖之試驗(yàn)培養(yǎng)基。每一處理9~15團(tuán)癒合組織，採(cǎi)每日16
小時(shí)照光培養(yǎng)，四週后調(diào)查癒合組織之存活率、具增殖個(gè)體比率及癒合組織
之增殖效率。癒合組織增殖率估算方式為由生長(zhǎng)良好的癒合組織培植體直接
再生癒合組織，或從部分褐化的培植體長(zhǎng)出新的癒合組織者。
三、不同濃度抗氧化劑與滲透壓調(diào)節(jié)劑處理對(duì)減低癒合組織褐化及芽體再生之影響
迷迭香癒合組織增殖后期，極易于表面產(chǎn)生褐化現(xiàn)象，分化產(chǎn)生的芽
原體也容易形成水浸狀、玻璃質(zhì)化。將癒合組織同樣分切成直徑約5㎜，利
用癒合組織增殖培養(yǎng)基，配合0,500,1000,1500,2000mg/l等不同濃度褐
化物質(zhì)吸附劑PVP(polyvinylpyrolidone,m.w.＝40000,Sigma)，期望能有
效與酚類(lèi)化合物鍵結(jié)，減少氧化產(chǎn)物對(duì)顯微鏡下觀察細(xì)胞的傷害，降低癒合組織的褐化率
，或滲透壓調(diào)節(jié)劑山梨糖醇(D-sorbitol,Sigma)0,0.1,0.2,0.3,0.4M處理，
減少癒合組織含水量，改善水浸狀現(xiàn)象；相同培養(yǎng)基并同時(shí)作為誘導(dǎo)芽體分
用，比較植株再生過(guò)程，降低芽體玻璃質(zhì)化現(xiàn)象及產(chǎn)生正常芽體之影響
。每一處理培養(yǎng)15團(tuán)癒合組織，共4個(gè)重複，四週后調(diào)查癒合組織改變情
形及芽體外觀。

四、懸浮顯微鏡下觀察細(xì)胞系之建立
將迷迭香葉片材料于光照培養(yǎng)下誘導(dǎo)產(chǎn)生的癒合組織切碎，利用0.5
㎜、0.71㎜、1.0㎜大小篩網(wǎng)濾過(guò)后，各取5ml顯微鏡下觀察細(xì)胞液，分別培養(yǎng)于含有20ml
增殖培養(yǎng)基之125ml具側(cè)管三角瓶中(圖1A)，以100rpm轉(zhuǎn)速之迴旋振盪器
振盪培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±1℃，光強(qiáng)度1000lux，進(jìn)行每日16小時(shí)之照光培
養(yǎng)。每日測(cè)量一次體積，測(cè)量體積時(shí)須注意溷勻顯微鏡下觀察細(xì)胞及培養(yǎng)液，調(diào)查其在側(cè)
管中增加的顯微鏡下觀察細(xì)胞沉降體積，以建立懸浮培養(yǎng)之生長(zhǎng)曲線；每隔18天作一次
繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)時(shí)需以篩網(wǎng)過(guò)濾后，去除較大之老顯微鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)，再將懸浮細(xì)
胞液移至新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每種處理5瓶三角瓶，重複六次生長(zhǎng)曲線測(cè)
定，探討懸浮培養(yǎng)時(shí)顯微鏡下觀察細(xì)胞組織之最適當(dāng)大小，作為利用生物反應(yīng)器或大量培
養(yǎng)時(shí)之參考。

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http://www.bjsgyq.com/ygxwj.html 熒光顯微鏡
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