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本文標(biāo)題:"如何試著去看PBS和DMEM是否污染?"

新聞來源:未知 發(fā)布時(shí)間:2012-4-3 1:07:56 本站主頁地址:http://m.mhzljd.cn

我的問題是最近忽然間發(fā)生的...
我養(yǎng)的細(xì)胞是乳癌細(xì)胞株MCF-7,使用DMEM/F12培養(yǎng),本身不加抗生素,
然而因?yàn)榧?xì)胞株是Tet-off system,所以有在maintain中加入2μg/ml的Doxycycline(Dox)
在實(shí)驗(yàn)起始時(shí)以PBS wash 而后分成有Dox與單純以DMEM/F12無抗生素者培養(yǎng),誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白表現(xiàn)...
----以上是常態(tài)培養(yǎng)情形


問題:
我上次是有發(fā)現(xiàn)我實(shí)驗(yàn)起始后誘導(dǎo)到一半(全程應(yīng)6天,但發(fā)生在第3天)
細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)得很快,而后就死了,DMDM/F12都變成黃色的,但是是澄清的,
細(xì)胞在盤底呈現(xiàn)一種白云狀(就是形狀很像一塊一塊的白云,但沒有飄起來),
如果去移動(dòng)dish,這時(shí)細(xì)胞就會(huì)飄起來,使medium變成沙沙的,
這時(shí)候因?yàn)橐苿?dòng)dish鏡檢有晃到,medium就變成混濁的了。
但是有含Dox的那一組則很正常(看起來)
(那時(shí)我懷疑是自己一開始種太多,而抗生素會(huì)稍微影響細(xì)胞生長(zhǎng),誘導(dǎo)需6天,可能因此dish太滿)
于是我重新按照一樣的方法再作一次,發(fā)現(xiàn)一模一樣的事又發(fā)生了,
心里很毛,所以重新解凍了,

新的細(xì)胞我解凍看起來很正常,貼的很好,繼代一次之后,

我試著種較少細(xì)胞數(shù),但隔天去看卻發(fā)現(xiàn)細(xì)胞不對(duì)勁,
我養(yǎng)的8盤DMDM/F12一樣都變成黃色的(但是澄清),
細(xì)胞在盤底再次呈現(xiàn)一種白云狀,
移動(dòng)dish鏡檢有晃到,medium就變成混濁的了。
鏡檢的時(shí)候看到的是有點(diǎn)霧霧的,只有少量細(xì)胞貼在上面。


請(qǐng)問各位先進(jìn),
這是代表什么種類的污染?是漿霉菌嗎?
或者有什么簡(jiǎn)易的方法可確定?
另如何試著去看PBS和DMEM是否污染?


回復(fù):
是水黴,PBS、DMEM、細(xì)胞培養(yǎng)箱都得檢查清洗
建議你不要去試了 可能有問題的通通扔掉
直接重配medium 重新解凍細(xì)胞吧!  

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