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實驗設備與實驗流程介紹
本實驗室設置有一細胞培養(yǎng)室,以方便活細胞培養(yǎng)時也同時連續(xù)擷
取細胞生長週期影像。細胞培養(yǎng)室是供體外培養(yǎng)細胞之用,主要之配備
有無菌層流操作臺(Laminar flow hood)及恒溫二氧化碳培養(yǎng)箱(CO2
incubator)。為保持操作臺之無菌(至少是低污染狀態(tài)),紫外線殺菌燈
及必要之抑菌劑均每日定時施用。為了能夠即時觀察培養(yǎng)之細胞,亦備
有一觀察用之倒立
顯微鏡(Inverted microscope,ZEISS Axiovert 200)。
培養(yǎng)室內(nèi)的其他附屬設備包括二氧化碳鋼瓶、滅菌鍋、水浴槽、….等,
供細胞培養(yǎng)之必要處理手續(xù)使用。
實作上我們先將細胞經(jīng)過靜置培養(yǎng)以后,將細胞種至材料上,由于
一般細胞的觀察使用穿透光觀察細胞,然而材料可能不透光,必須對細
胞做螢光染色,接著用影像擷取系統(tǒng)做長時間的連續(xù)取像,若要在活細
胞培養(yǎng)系統(tǒng)做長時間培養(yǎng),需用活細胞做 DNA 轉殖,產(chǎn)生螢光蛋白來
觀察細胞在材料上的運動,但用 DNA 轉殖的成本過高,且本研究欲解
決的重點在于分割影像找到細胞的資訊,故先用免疫螢光化學染色方法
代替 DNA 轉殖,雖然為死細胞,但影像特性類似,皆感應螢光的亮度
反射產(chǎn)生影像,與穿透光產(chǎn)生的相位差影像有別
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