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植物和細(xì)菌細(xì)胞的大小測(cè)量多功能分析
顯微鏡
裂解組織和細(xì)胞的方法
裂解細(xì)胞最常用的方法是物理的方法。裂解大部分動(dòng)物
細(xì)胞所用的力比較溫和,而裂解植物和細(xì)菌的細(xì)胞則可能需
要很大的力,因?yàn)樵谶@些有機(jī)體中存在著細(xì)胞壁,使細(xì)胞的裂
解更為困難。物理的方法可以按照是由細(xì)胞和固體之間的切
變力產(chǎn)生裂解(固體切變法),或是在細(xì)胞懸浮液中由液體切
變而產(chǎn)生裂解(液體切變法)來(lái)分類。
固體切變法:現(xiàn)代的固體切變法是在用砂子或磨蝕
劑在研缽和研杵之間研磨的方法基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。這些方
法現(xiàn)在禾常用于裂解動(dòng)物細(xì)胞,因?yàn)榭梢杂幸恍﹦e的較溫和
的方法,但是它們被用于植物和細(xì)菌細(xì)胞的工作。通常,磨蝕
劑顆粒必須和細(xì)胞的大小相等,并且在研磨時(shí)必須保持其棱
角,但有一個(gè)缺點(diǎn),在操作過(guò)程中可能會(huì)損傷較大的細(xì)胞器
(例如葉綠體)。
其他方法:在裂解細(xì)胞中已經(jīng)使用的其他方法包括
細(xì)胞經(jīng)滲透沖擊而破裂;用酶消化細(xì)胞壁例如從蝸牛中得到
的復(fù)合酶制禮它含有纖維素酶、殼糖酶和脂酶;以及使用溶
菌酶。細(xì)胞交替的冰凍和融化;自溶作用;以及使用乙酸乙酯
或甲苯一類的有機(jī)溶劑也已成功地用于某些細(xì)胞類型。
從上述各種使細(xì)胞裂解所用的技術(shù)中,很明顯的是大部
分方法都產(chǎn)生熱。由于溫度上升使大部分酶變性,因此必須
使所有的細(xì)胞裂解和細(xì)胞器分離的操作過(guò)程在低溫下進(jìn)行。
在O℃左右的冷室中工作;通過(guò)周圍的冰來(lái)冷卻細(xì)胞懸浮液;
使用冷的懸浮介質(zhì)和容器一般都可以做到這一點(diǎn)。但是,必
須注意,有少數(shù)酶對(duì)冷是不穩(wěn)定的,在冷卻時(shí)可能會(huì)喪失它們
的活性。
不同的生物組織在勻漿時(shí)會(huì)出現(xiàn)特殊的問(wèn)題,這主要通
過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)來(lái)解決。為了得到適當(dāng)?shù)闹貜?fù)性,必須小心地
注意各種因素,例如溫度、裂解的時(shí)間、速度和壓力的變化。理
想的勻漿是能使它十分順利地進(jìn)行以后的分級(jí)分離,或正如
已被公認(rèn)的:“勻漿的好壞要在分級(jí)分離中來(lái)驗(yàn)證”。
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