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本文標題："熒光強度的細胞分析用圖像熒光顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2014-7-5 0:58:44 本站主頁地址：http://m.mhzljd.cn
熒光強度的細胞分析用圖像熒光顯微鏡
對大多數(shù)希望追蹤一個特定蛋白質的研究者來說，使用FP需要將日的基因的
cDNA與FP構建成融合蛋白載體然后轉化到宿主細胞或整個生物體中。與幾平
所有的GFP變體和珊瑚來源的FP相比.EGFP作為融合蛋白效果最好。因此如果可
能的話，應對GFP(或者其他良好的衍生物如Emerald)進行預實驗。在使用其他光
譜區(qū)的FP之前，首先利用GFP優(yōu)化載體策略，從長遠來看往往證明這是值得的。在
最好的情況下，新的GFP嵌合體及其他光譜區(qū)的衍生變體能使目標蛋白行使正常細胞
功能，同時FP作為標記探針報告蛋白結合位置。然而，這并不總是那么簡單，研究人
員往往懷疑采用不同的FP融合載體策略是否能產(chǎn)生更好的效果。
似設宿主細胞是健康的，轉染過程不會產(chǎn)生太多的創(chuàng)傷，那么FP工作中遇到的最
常見的問題是熒光信號太弱、聚集化、錯誤定位、融合蛋白無功能以及預期的熒光強
度被抑制。如果這些問題可以得到解決，研究者必須選擇瞬時表達還是穩(wěn)定表達，瞬
時轉染的細胞表達水平差異很大。而穩(wěn)定表達需采取更多的時間來選擇穩(wěn)定表達的細
胞群，但往往會產(chǎn)生更好的效果。通常首先考慮(并且更快)用組成性啟動子瞬時表
達FP融合蛋白，然后選擇低水平熒光強度的細胞，這些細胞的表達水平可能接近內源
狀態(tài)而不影響細胞的正常功能。
然而構建穩(wěn)定的細胞系能定見比較融合蛋白與
對應的內源蛋白的表達水平，是更安全的途徑。或者也可通過誘導啟動子來構建融合
表達載體能控制月的蛋自的表達水平。對于許多樣品來說，可以在內源墓因插人FP,
構建插人內源表達的FP標記，這種方法在模式生物，如醉毋、線蟲和小鼠中的應用越
來越廣泛，而幾是定量生物學實驗的最好方法。
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