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本文標(biāo)題："食品微生物的檢測-采用不同熒光標(biāo)記分子"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-8-13 18:17:36 本站主頁地址：http://m.mhzljd.cn
食品微生物的檢測-采用不同熒光標(biāo)記分子
分子信標(biāo)技術(shù)(Stratagene, La Jolla, CA)是一種全新的技術(shù)
，即將用于食品微生物的檢測之中。在這項技術(shù)中，所有的反應(yīng)會
在同一個試管中完成。分子信標(biāo)是一個特制的發(fā)夾形的雜交探針，
它用來與目標(biāo)PCR產(chǎn)物結(jié)合。該探針的一端結(jié)合了一個熒光基團，
另一端結(jié)合了一個熒光淬滅基團。當(dāng)不存在目標(biāo)PC R產(chǎn)物時，分子
信標(biāo)以發(fā)夾形式存在，不會產(chǎn)生熒光信號。當(dāng)反應(yīng)生成目標(biāo)PCR產(chǎn)
物時，分子信標(biāo)與PCR產(chǎn)物結(jié)合從而導(dǎo)致發(fā)夾結(jié)構(gòu)伸展。這時淬滅
基團遠(yuǎn)離熒光基團，熒光信號產(chǎn)生并被檢測到。熒光信號的檢測是
與PC R反應(yīng)同步進行的，實現(xiàn)了目標(biāo)PCR產(chǎn)物的“實時”檢測，進
一步可證實樣品中目標(biāo)病原菌的存在。該系統(tǒng)與TaqMan系統(tǒng)具有相
同的效率，不同之處在于分子信標(biāo)直接檢測PCR產(chǎn)物的存在，而Taq
Man系統(tǒng)只能報告鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的發(fā)生。采用具有不同熒光標(biāo)記的分子
信標(biāo)，可在同一個試管中檢測不同的PCR產(chǎn)物，因此可以對多種目
標(biāo)病原菌或分子進行“多重分析”。這是一項嶄新的技術(shù)，目前尚
未在食品微生物檢測領(lǐng)域普及。
PCR系統(tǒng)的一個主要問題是PCR產(chǎn)物的交叉污染。如果陽性PCR
產(chǎn)物(例如前一次反應(yīng)得到的沙門菌PCR產(chǎn)物)進人到下次分析的反
應(yīng)體系中，就會產(chǎn)生假陽性結(jié)果。法國巴斯德研究所(Paris, Fran
ce)開發(fā)的Probelia系統(tǒng)試圖在整個PCR反應(yīng)過程中采用尿啥吮替代
胸腺啥陡，以消除PCR產(chǎn)物的污染。所以反應(yīng)管中只有A, U, G, C
四種堿基而沒有T。由Probelia系統(tǒng)得到的PC R擴增產(chǎn)物將是AU, G
C配對，而不是常規(guī)的AT, GC配對。PCR產(chǎn)物與微孔板中的已知序列
雜交，從而得以識別。雜交結(jié)果的檢測類似于微孔板中ELISA結(jié)果
的檢測，也是通過顏色反應(yīng)顯示出來。
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